Nota técnica | ABSOR.B™
COMPRENDER LA ABSORBANCIA EN LONGITUDES DE ONDA ESPECÍFICAS: PRECISIÓN ASEQUIBLE EN ESPECTROFOTOMETRÍA
por Dimitria Camasão,
Aplicación Científicos, Rheolution Inc.
¿QUÉ ES LA ABSORBANCIA? EXPLORANDO SU FUNCIÓN EN LA ESPECTROFOTOMETRÍA
La absorbancia es un concepto clave en el campo de la espectrofotometría, una técnica que se usa para medir la cantidad de luz que absorbe una sustancia en un amplio rango de longitudes de onda. Es una magnitud adimensional que se calcula a partir del logaritmo de la relación entre la luz incidente y la luz transmitida a través de una muestra. El espectro de absorbancia, que suele representarse en un gráfico, muestra las longitudes de onda en las que una sustancia absorbe la luz con mayor intensidad (Figura 1). Esta información resulta útil en diversos campos científicos, como la biología, la química, la bioquímica y la biología molecular, para identificar y cuantificar compuestos o moléculas específicos en una muestra.
Figura 1: Espectro de absorbancia de la solución de azul de metileno.
MEDICIÓN DE LA ABSORBANCIA EN UNA LONGITUD DE ONDA ESPECÍFICA CON ABSOR.B™: PRECISIÓN EN EL ANÁLISIS QUÍMICO Y BIOQUÍMICO
El ABSOR.B™ forma parte de la familia de instrumentos ópticos CASCAD.S™ de Rheolution. Este moderno instrumento mide la luz que absorbe una sustancia en longitudes de onda concretas mediante cartuchos ópticos intercambiables que emiten luz monocromática. Los valores de absorbancia en una longitud de onda concreta se usan mucho en análisis químicos y bioquímicos para cuantificar la concentración de una sustancia en solución o para seguir la evolución de las reacciones a lo largo del tiempo. Los diferentes cartuchos de emisión (como el Emitt.405, el Emitt.520, el Emitt.635 y el Emitt.850) te permiten elegir la longitud de onda adecuada para cada sustancia. Además, las mediciones se pueden recopilar y almacenar de forma continua en la aplicación Soft Matter Analytics™, que permite controlar varias unidades ABSOR.B™.
ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA DEL AZUL DE METILENO EN LONGITUDES DE ONDA DISCRETA CON ABSOR.B™
El azul de metileno es una sal que se usa como medicamento en clínicas y como colorante en laboratorios de hematología, inmunohematología y microbiología clínica para teñir células y material genético. Sus picos de absorción están a 668 y 609 nm (Merck Index). Se probaron diferentes concentraciones de azul de metileno en agua desionizada en el ABSOR.B™ utilizando viales de cristal transparente de 1 ml y los cartuchos Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635 y Emitt.850.
La figura 2 muestra los resultados medios ± desviación estándar (tres muestras diferentes por cada concentración analizada, n = 3). Tal y como cabía esperar a partir del espectro (flechas de la figura 1), la luz roja (635 nm) se absorbió en gran medida, seguida de una ligera absorción de la luz verde (520 nm). Las luces violeta-azul (405 nm) e infrarroja (850 nm) tuvieron una absorción casi nula en todo el rango de concentraciones estudiado.
La relación entre la absorbancia y la concentración es lineal según la ley de Beer-Lambert, siempre que la solución no sea demasiado concentrada y la luz incidente sea monocromática. La relación lineal que se obtiene con la luz roja se puede usar para calcular la concentración de azul de metileno en una solución desconocida.
Según los resultados de absorbancia, la transmitancia de la luz roja (635 nm) disminuyó a medida que aumentaba la concentración de azul de metileno en la solución. A 10 mg/L, se transmitía menos del 10 % de la luz. La transmitancia disminuyó ligeramente para las luces verde (520 nm), azul violeta (405 nm) e infrarroja (850 nm) (siempre por encima del 85 %).
Figura 2: Absorbancia y transmitancia del azul de metileno en función de la concentración (en mg/L) utilizando los cartuchos ópticos Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635 y Emitt.850 en el ABSOR.B™ (n = 3, se incluyen las barras de error, aunque no se ven).
Estos resultados también muestran la alta repetibilidad de las mediciones (con barras de error incluidas, aunque no se ven), con desviaciones estándar siempre inferiores al 5 %. En general, ABSOR.B™ es un instrumento moderno y asequible para determinar con precisión la concentración de diferentes solutos utilizando la longitud de onda adecuada.
PUNTOS CLAVE
- La versatilidad del ABSOR.B™ te permite usar el mismo instrumento para medir la absorbancia y la transmitancia de diferentes soluciones, seleccionando la longitud de onda adecuada gracias a la variedad de cartuchos disponibles.
- Las curvas de calibración obtenidas a partir de muestras patrón se pueden guardar en la aplicación de la tableta para determinar rápidamente la concentración de la solución.
- La modularidad del ABSOR.B™ te permite ampliar tu plataforma de ensayo a medida que cambian tus necesidades, con varias unidades, diferentes cartuchos para la emisión y recepción de luz, y soportes para muestras.
Ponte en contacto con nosotros para pedir un presupuesto o para saber más
Artículos relacionados
Conozca una solución moderna y asequible para medir la absorbancia en longitudes de onda específicas con precisión para aplicaciones de laboratorio.