Nota Técnica | ABSOR.B™
ENTENDENDO A ABSORVÂNCIA EM COMPRIMENTOS DE ONDA ESPECÍFICOS: PRECISÃO ACESSÍVEL NA ESPECTROFOTOMETRIA
por Dimitria Camasão,
Cientistas de Aplicação, Rheolution Inc.
O QUE É A ABSORBÂNCIA? EXPLORANDO SEU PAPEL NA ESPECTROFOTOMETRIA
A absorvância é um conceito fundamental no campo da espectrofotometria, técnica utilizada para medir a quantidade de luz absorvida por uma substância em uma ampla faixa de comprimentos de onda. Trata-se de uma grandeza adimensional derivada do logaritmo da razão entre a luz incidente e a luz transmitida através de uma amostra. O espectro de absorvância, frequentemente representado por um gráfico, revela os comprimentos de onda nos quais uma substância absorve a luz com maior intensidade (Figura 1). Essa informação é útil em diversos campos científicos, como biologia, química, bioquímica e biologia molecular, para identificar e quantificar compostos ou moléculas específicas em uma amostra.
Figura 1: Espectro de absorvância da solução de azul de metileno.
MEDIÇÃO DA ABSORVÂNCIA EM UM COMPRIMENTO DE ONDA ESPECÍFICO COM O ABSOR.B™: PRECISÃO EM ANÁLISES QUÍMICAS E BIOQUÍMICAS
O ABSOR.B™ faz parte da família CASCAD.S™ de instrumentos ópticos da Rheolution. Esse moderno instrumento mede a luz absorvida por uma substância em comprimentos de onda discretos, utilizando cartuchos ópticos intercambiáveis que emitem luz monocromática. Os valores de absorvância em um determinado comprimento de onda são amplamente utilizados em análises químicas e bioquímicas para quantificar a concentração de uma substância em solução ou para monitorar reações ao longo do tempo. Os diferentes cartuchos de emissão (como Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635, Emitt.850) permitem que o usuário selecione o comprimento de onda adequado para a substância em questão. Além disso, as medições podem ser coletadas continuamente e armazenadas no aplicativo Soft Matter Analytics™, que pode controlar várias unidades ABSOR.B™.
ABSORVÂNCIA E TRANSMISSÃO DO AZUL DE METILENO EM COMPRIMENTOS DE ONDA DISCRETO COM O ABSOR.B™
O azul de metileno é um sal utilizado como medicamento em clínicas e como corante em laboratórios de hematologia, imunohematologia e microbiologia clínica para a coloração de células e material genético. Seu pico de absorção ocorre a 668 e 609 nm (Merck Index). Diferentes concentrações de azul de metileno em água desionizada foram testadas no ABSOR.B™ utilizando frascos de vidro transparente de 1 mL e os cartuchos Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635 e Emitt.850.
A Figura 2 mostra os resultados médios ± desvio padrão (três amostras diferentes por concentração testada, n=3). Conforme esperado a partir do espectro (setas na Figura 1), a luz vermelha (635 nm) foi fortemente absorvida, seguida por uma leve absorção da luz verde (520 nm). As luzes violeta-azul (405 nm) e infravermelha (850 nm) apresentaram absorção quase nula na faixa de concentrações estudada.
A relação entre a absorvância e a concentração é linear, de acordo com a Lei de Beer-Lambert, desde que a solução não seja muito concentrada e que a luz incidente seja monocromática. A relação linear obtida com a luz vermelha pode ser utilizada para determinar a concentração de azul de metileno em uma solução desconhecida.
De acordo com os resultados de absorvância, a transmitância da luz vermelha (635 nm) diminuiu à medida que a concentração de azul de metileno na solução aumentou. A 10 mg/L, menos de 10% da luz era transmitida. A transmitância apresentou uma ligeira diminuição para as luzes verde (520 nm), azul-violeta (405 nm) e infravermelha (850 nm) (sempre superior a 85%).
Figura 2: Absorvância e transmitância do azul de metileno em função da concentração (em mg/L) utilizando os cartuchos ópticos Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635 e Emitt.850 no ABSOR.B™ (n=3, barras de erro incluídas, mas não visíveis).
Esses resultados também ilustram a alta repetibilidade das medições (barras de erro incluídas, mas não visíveis), com desvios-padrão sempre inferiores a 5 %. De modo geral, o ABSOR.B™ é um instrumento moderno e acessível para determinar com precisão a concentração de diferentes solutos utilizando o comprimento de onda adequado.
PRINCIPAIS CONCLUSÕES
- A versatilidade do ABSOR.B™ permite que o usuário utilize o mesmo instrumento para medir a absorvância e a transmitância de diferentes soluções, selecionando o comprimento de onda adequado por meio da variedade de cartuchos disponíveis.
- As curvas de calibração obtidas a partir de amostras padrão podem ser armazenadas no aplicativo do tablet para uma determinação rápida da concentração da solução.
- A modularidade do ABSOR.B™ permite que o usuário amplie sua plataforma de testes à medida que as necessidades evoluem, utilizando várias unidades, diferentes cartuchos para emissão e recepção de luz e suportes para amostras.
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