Note technique | ABSOR.B™
COMPRENDRE L'ABSORBANCE À DES LONGUEURS D'ONDE SPÉCIFIQUES : UNE PRÉCISION ABORDABLE EN SPECTROPHOTOMÉTRIE
par Dimitria Camasão,
Application Chercheurs, Rheolution Inc.
QU'EST-CE QUE L'ABSORBANCE ? EXPLORATION DE SON RÔLE EN SPECTROPHOTOMÉTRIE
L’absorbance est un concept essentiel dans le domaine de la spectrophotométrie, une technique utilisée pour mesurer la quantité de lumière absorbée par une substance sur une large gamme de longueurs d’onde. Il s’agit d’une grandeur sans dimension dérivée du logarithme du rapport entre la lumière incidente et la lumière transmise à travers un échantillon. Le spectre d’absorbance, souvent représenté sous forme de graphique, révèle les longueurs d’onde auxquelles une substance absorbe le plus fortement la lumière (figure 1). Ces informations sont utiles dans divers domaines scientifiques tels que la biologie, la chimie, la biochimie et la biologie moléculaire pour identifier et quantifier des composés ou des molécules spécifiques dans un échantillon.
Figure 1 : Spectre d’absorbance de la solution de bleu de méthylène.
MESURE DE L'ABSORBANCE À UNE LONGUEUR D'ONDE SPÉCIFIQUE AVEC ABSOR.B™ : PRÉCISION DANS LES ANALYSES CHIMIQUES ET BIOCHIMIQUES
L’ABSOR.B™ fait partie de la gamme d’instruments optiques CASCAD.S™ de Rheolution. Cet instrument moderne mesure la lumière absorbée par une substance à des longueurs d’onde discrètes à l’aide de cartouches optiques interchangeables émettant une lumière monochromatique. Les valeurs d’absorbance à une longueur d’onde donnée sont largement utilisées en analyse chimique et biochimique pour quantifier la concentration d’une substance en solution ou pour suivre l’évolution des réactions dans le temps. Les différentes cartouches d’émission (telles que Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635, Emitt.850) permettent à l’utilisateur de sélectionner la longueur d’onde adaptée à la substance considérée. De plus, les mesures peuvent être collectées en continu et enregistrées dans l’application Soft Matter Analytics™, qui permet de contrôler plusieurs unités ABSOR.B™.
ABSORBANCE ET TRANSMISSION DU BLEU DE MÉTHYLÈNE À DES LONGUEURS D'ONDE DISCRÈTES AVEC ABSOR.B™
Le bleu de méthylène est un sel utilisé comme médicament en milieu hospitalier et comme colorant en laboratoire dans les domaines de l’hématologie, de l’immuno-hématologie et de la microbiologie clinique pour la coloration des cellules et du matériel génétique. Ses pics d’absorption se situent à 668 et 609 nm (Merck Index). Différentes concentrations de bleu de méthylène dans de l’eau déionisée ont été testées dans l’ABSOR.B™ à l’aide de flacons en verre transparent de 1 ml et des cartouches Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635 et Emitt.850.
La figure 2 présente les résultats moyens ± l’écart-type (trois échantillons différents par concentration testée, n = 3). Comme le laissaient présager les spectres (flèches sur la figure 1), la lumière rouge (635 nm) a été fortement absorbée, suivie d’une légère absorption de la lumière verte (520 nm). Les lumières violet-bleu (405 nm) et infrarouge (850 nm) ont présenté une absorption quasi nulle sur toute la plage de concentrations étudiée.
La relation entre l’absorbance et la concentration est linéaire, conformément à la loi de Beer-Lambert, à condition que la solution ne soit pas trop concentrée et que la lumière incidente soit monochromatique. La relation linéaire obtenue avec la lumière rouge peut être utilisée pour déterminer la concentration en bleu de méthylène dans une solution inconnue.
Conformément aux résultats d’absorbance, la transmittance de la lumière rouge (635 nm) diminuait à mesure que la concentration en bleu de méthylène dans la solution augmentait. À 10 mg/L, moins de 10 % de la lumière était transmise. La transmittance présentait une légère diminution pour les lumières verte (520 nm), bleu-violet (405 nm) et infrarouge (850 nm) (toujours supérieure à 85 %).
Figure 2: Absorbance et transmittance du bleu de méthylène en fonction de la concentration (en mg/L) à l’aide des cartouches optiques Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635 et Emitt.850 dans l’ABSOR.B™ (n = 3, barres d’erreur incluses mais non visibles).
Ces résultats illustrent également la grande répétabilité des mesures (barres d’erreur incluses mais non visibles), avec des écarts-types toujours inférieurs à 5 %. Dans l’ensemble, l’ABSOR.B™ est un instrument moderne et abordable permettant de déterminer avec précision la concentration de différents solutés en utilisant la longueur d’onde appropriée.
POINTS CLÉS À RETENIR
- La polyvalence de l’ABSOR.B™ permet à l’utilisateur d’utiliser le même appareil pour mesurer l’absorbance et la transmittance de différentes solutions, en sélectionnant la longueur d’onde appropriée grâce à la gamme de cartouches disponibles.
- Les courbes d’étalonnage établies à partir d’échantillons étalons peuvent être enregistrées dans l’application pour tablette afin de déterminer rapidement la concentration de la solution.
- La modularité de l’ABSOR.B™ permet à l’utilisateur d’étendre sa plateforme d’essais à mesure que ses besoins évoluent, grâce à plusieurs unités, à différentes cartouches d’émission et de réception de lumière, ainsi qu’à des porte-échantillons.
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