Nota tecnica | ABSOR.B™
COMPRENDERE L'ASSORBANZA A SPECIFICHE LUNGHEZZE D'ONDA: PRECISIONE A PREZZI ACCESSIBILI NELLO SPETTROFOTOMETRIA
di Dimitria Camasão,
Applicazione Scienziati, Rheolution Inc.
COS’È L’ASSORBANZA? ALLA SCOPERTA DEL SUO RUOLO NELLO SPETTROFOTOMETRIA
L’assorbanza è un concetto fondamentale nel campo della spettrofotometria, una tecnica usata per misurare la quantità di luce assorbita da una sostanza su un ampio intervallo di lunghezze d’onda. È una grandezza adimensionale derivata dal logaritmo del rapporto tra la luce incidente e quella trasmessa attraverso un campione. Lo spettro di assorbanza, spesso rappresentato sotto forma di grafico, mostra le lunghezze d’onda alle quali una sostanza assorbe la luce con maggiore intensità (Figura 1). Queste informazioni sono utili in vari campi scientifici, come la biologia, la chimica, la biochimica e la biologia molecolare, per identificare e quantificare composti o molecole specifiche presenti in un campione.
Figura 1: Spettro di assorbimento della soluzione di blu di metilene.
MISURAZIONE DELL'ASSORBANZA A UNA LUNGHEZZA D'ONDA SPECIFICA CON ABSOR.B™: PRECISIONE NELL'ANALISI CHIMICA E BIOCHIMICA
L’ABSOR.B™ fa parte della famiglia di strumenti ottici CASCAD.S™ di Rheolution. Questo moderno strumento misura la luce assorbita da una sostanza a lunghezze d’onda discrete utilizzando cartucce ottiche intercambiabili che emettono luce monocromatica. I valori di assorbanza a una determinata lunghezza d’onda sono ampiamente utilizzati nelle analisi chimiche e biochimiche per quantificare la concentrazione di una sostanza in soluzione o per monitorare le reazioni nel tempo. Le diverse cartucce di emissione (come Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635, Emitt.850) ti permettono di scegliere la lunghezza d’onda giusta per la sostanza che stai analizzando. Inoltre, le misurazioni possono essere raccolte e salvate in modo continuo nell’app Soft Matter Analytics™, che permette di controllare più unità ABSOR.B™.
ASSORBANZA E TRASMISSIONE DEL BLU DI METILENE A LUNGHEZZE D'ONDA SPECIFICHE CON ABSOR.B™
Il blu di metilene è un sale usato come farmaco in ambito clinico e come colorante nei laboratori di ematologia, immunoematologia e microbiologia clinica per colorare cellule e materiale genetico. I suoi picchi di assorbimento si trovano a 668 e 609 nm (Merck Index). Sono state testate diverse concentrazioni di blu di metilene in acqua deionizzata con l’ABSOR.B™, utilizzando fiale di vetro trasparente da 1 mL e le cartucce Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635 ed Emitt.850.
La Figura 2 mostra i risultati medi ± deviazione standard (tre campioni diversi per ogni concentrazione testata, n=3). Come ci si aspettava dallo spettro (frecce nella Figura 1), la luce rossa (635 nm) è stata fortemente assorbita, seguita da un leggero assorbimento della luce verde (520 nm). La luce viola-blu (405 nm) e quella infrarossa (850 nm) hanno mostrato un assorbimento quasi nullo nell’intervallo di concentrazioni studiato.
La relazione tra assorbanza e concentrazione è lineare secondo la legge di Beer-Lambert, a condizione che la soluzione non sia troppo concentrata e che la luce incidente sia monocromatica. La relazione lineare ottenuta con la luce rossa può essere usata per determinare la concentrazione di blu di metilene in una soluzione sconosciuta.
In base ai risultati dell’assorbanza, la trasmittanza della luce rossa (635 nm) è diminuita all’aumentare della concentrazione di blu di metilene nella soluzione. A 10 mg/L, la luce trasmessa era inferiore al 10%. La trasmittanza ha mostrato una leggera diminuzione per la luce verde (520 nm), viola-blu (405 nm) e infrarossa (850 nm) (sempre superiore all’85%).
Figura 2: Assorbanza e trasmittanza del blu di metilene in funzione della concentrazione (in mg/L) utilizzando le cartucce ottiche Emitt.405, Emitt.520, Emitt.635 ed Emitt.850 nell’ABSOR.B™ (n=3, barre di errore incluse ma non visibili).
Questi risultati dimostrano anche l’elevata ripetibilità delle misurazioni (barre di errore incluse ma non visibili), con deviazioni standard sempre inferiori al 5%. Nel complesso, ABSOR.B™ è uno strumento moderno e conveniente per determinare con precisione la concentrazione di diversi soluti utilizzando la lunghezza d’onda adeguata.
PUNTI CHIAVE
- La versatilità dell’ABSOR.B™ permette di usare lo stesso strumento per misurare l’assorbanza e la trasmittanza di diverse soluzioni, selezionando la lunghezza d’onda giusta grazie alla vasta gamma di cartucce disponibili.
- Le curve di calibrazione ricavate dai campioni standard possono essere salvate nell’app per tablet per determinare velocemente la concentrazione della soluzione.
- La modularità di ABSOR.B™ permette all’utente di ampliare la propria piattaforma di analisi man mano che le esigenze cambiano, grazie a più unità, diverse cartucce per l’emissione e la ricezione della luce e portacampioni.
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